¿ÞÂÊ ¸Þ´º ŸÀÌÆ² À̹ÌÁö
Áֿ伺°ú

Home < Áֿ伺°ú < Áֿ伺°ú

       Àü»çü ºÐ¼®°ú DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ¼Óµµ °¡¼ÓÈ­
               
       ISBC        2018.09.04 14:18        4759
 

Àü»çü ºÐ¼®°ú DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ¼Óµµ °¡¼ÓÈ­


Çѱ¹°úÇбâ¼ú¿ø À̳²ÀÏ ¼®¹Ú»çÅëÇÕ °úÁ¤


Namil Lee, JongOh Shin, Jin Hyoung Park, Gyun Min Lee, Suhyung Cho, and Byung-Kwan Cho (2016) Targeted Gene Deletion Using DNA-Free RNA-guided Cas9 Nuclease Accelerates Adaptation of CHO cells to Suspension Culture. ACS Synthetic Biology, DOI: 10.1021/acssynbio.5b00249


1. ¿¬±¸¹è°æ


°í·É Àα¸ÀÇ Áõ°¡·Î ÀÎÇØ ¾Ï°ú ¸é¿ª °ü·Ã ÁúȯÀÌ ±Þ¼Óµµ·Î Áõ°¡µÇ°í ÀÖ¾î Ç×üÀǾàǰ ½ÃÀå±Ô¸ð´Â Áö¼ÓÀûÀ¸·Î È®´ëµÇ°í ÀÖ´Ù. CHO ¼¼Æ÷ÁÖ´Â Ä¡·á¿ë ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúÀÇ »ý»êÀ» À§ÇÏ¿© »ê¾÷ÀûÀ¸·Î °¡Àå ¸¹ÀÌ »ç¿ëµÇ´Â ¼¼Æ÷ÁÖ·Î ÇöÀç±îÁö »ý»êµÇ´Â 1/3 ÀÌ»óÀÇ Ä¡·á¿ë ´Ü¹éÁúÀÌ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ ÅëÇÏ¿© »ý»êµÇ°í ÀÖ´Ù. ÇÏÁö¸¸ ±âÁ¸ÀÇ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ °ü·Ã ¿¬±¸´Â ¹è¾ç Á¶°Ç ÃÖÀûÈ­¿¡ ÃÊÁ¡À» ¸ÂÃß¾î ÁøÇàµÇ¾î ¿ÔÀ» »Ó, ±Ùº»ÀûÀ¸·Î °³·®µÈ ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ °³¹ßÇϱâ À§ÇÑ ¿¬±¸´Â ¸Å¿ì ºÎÁ·ÇÑ Çö½ÇÀÌ´Ù.


Ä¡·á¿ë ´Ü¹éÁú ÀǾàǰÀÇ ´ë·® »ý»êÀ» À§Çؼ­´Â ºÎÂø¹è¾ç ¼¼Æ÷ÀÎ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ ¹«Ç÷û¹èÁö¿¡¼­ ºÎÀ¯¹è¾çÀÌ °¡´ÉÅä·Ï ÀûÀÀ½ÃŰ´Â °ÍÀÌ ÀϹÝÀûÀÌ´Ù. ÇÑ ´ÞÀÌ ³Ñ´Â ±â°£ÀÌ ¼Ò¿äµÇÁö¸¸ ¼¼Æ÷°¡ °°Àº ¸éÀû´ç ¸¹Àº ¼ö·Î ÀÚ¶ö ¼ö ÀÖ°í, »ý»êµÈ ÀǾàǰÀÇ Á¤Á¦°¡ À¯¸®Çϸç, Ç÷ûÀ¸·Î ÀÎÇØ ¹ß»ýÇÏ´Â ¿À¿°¹®Á¦µé·ÎºÎÅÍ ÀÚÀ¯·Ó±â ¶§¹®¿¡ ÇʼöÀûÀÎ °úÁ¤À̶ó°í ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÇÏÁö¸¸ ¾ÆÁ÷±îÁö ÀûÀÀ ±âÀÛ¿¡ ´ëÇØ ¾Ë·ÁÁø ¹Ù°¡ ¾ø¾î °³·®ÇÑ ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡ ´ëÇØ ÃÖÀûÈ­µÈ ¹«Ç÷û¹èÁö¸¦ °³¹ßÇÏ´Â ¿¬±¸µé¸¸ ÁøÇàÀÌ µÇ¾î¿Ô´Ù.


ÃÖ±Ù DNA sequencing ±â¼úÀÇ ºñ¾àÀûÀÎ ¹ßÀüÀ¸·Î CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ genome sequence, Àü»çü, ´Ü¹éü µîÀÇ ´Ù¾çÇÑ omics µ¥ÀÌÅͰ¡ ´©ÀûµÇ°í ÀÖÀ¸¸ç, ¹æ´ëÇÑ µ¥ÀÌÅ͸¦ ¹ÙÅÁÀ¸·Î À¯ÀüÀÚ¿Í Ç¥ÇöÇüÀÇ »ó°ü°ü°è¸¦ ¹àÈ÷·Á´Â ½Ãµµ°¡ Áõ°¡µÇ°í ÀÖ´Ù. ƯÈ÷, CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ genome sequence Á¤º¸´Â À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ±â¼ú·Î °¢±¤ ¹Þ°í ÀÖ´Â ±â¼úÀÎ Clustered, Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) ½Ã½ºÅÛÀ» CHO ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡ Àû¿ë °¡´ÉÇÏ°Ô Çϸ鼭 À¯ÀüÀÚ ¿£Áö´Ï¾î¸µÀ» ÅëÇÑ °³·® ¼¼Æ÷ÁÖ °³¹ßÀÌ °¡´ÉÇØÁ³´Ù.


CRISPR ½Ã½ºÅÛÀº Cas9 ´Ü¹éÁú°ú sgRNA·Î ±¸¼ºµÇ¾î ÀÖÀ¸¸ç sgRNA°¡ genome »óÀÇ Æ¯ÀÌÀûÀÎ À§Ä¡·Î endonuclease ±â´ÉÀ» °¡Áø Cas9 ´Ü¹éÁúÀ» À¯µµÇÏ¿© Double Strand Break (DSB)À» ÀÏÀ¸Å²´Ù. Àß·ÁÁø µÎ genomeÀº »ý¸íü°¡ °¡Áö°í ÀÖ´Â DNA º¹±¸ ±âÀÛÀÎ Non Homologous End Joining (NHEJ) ¶Ç´Â Homologous Recombination (HR)¿¡ ÀÇÇØ º¹±¸ µÇ³ª, NHEJ °°Àº °æ¿ì Á¤È®È÷ º¹±¸ÇÏÁö ¸øÇϰí ªÀº ¿°±â¹è¿­À» »ðÀÔ ¶Ç´Â °á½ÇÇÏ¸ç º¹±¸Çϱ⠶§¹®¿¡ ÇØ´ç À§Ä¡¿¡ Á¸ÀçÇÏ´Â À¯ÀüÀÚ°¡ Á¤»óÀûÀ¸·Î ÀÛµ¿ÇÒ ¼ö ¾ø°Ô ¸¸µç´Ù. ÀÌ¿Í °°Àº Ư¼º ¶§¹®¿¡ CRISPR ½Ã½ºÅÛÀº À¯ÀüÀÚ¸¦ knockout ½ÃÄÑ ±â´ÉÀ» ¿¬±¸Çϴµ¥ Ȱ¹ßÈ÷ »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù. ÀϹÝÀûÀ¸·Î CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» »ç¿ëÇÒ ¶§´Â Cas9 ´Ü¹éÁú°ú sgRNA¸¦ DNA ÇüÅ·Π¼¼Æ÷ ³»¿¡ Àü´ÞÇÑ µÚ ¹ßÇö½ÃŰ´Â ¹æ¹ýÀ» ÀÌ¿ëÇÑ´Ù. ÇÏÁö¸¸ ÀÌ¿Í °°Àº DNA Àü´Þ ¹æ¹ýÀº genome»óÀÇ ¹«ÀÛÀ§Àû À§Ä¡¿¡ DNA »ðÀÔÀ» À¯¹ßÇÒ ¼ö Àֱ⠶§¹®¿¡ Ä¡·á¿ë ´Ü¹éÁú »ý»ê¿ë ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡´Â ¾ÈÁ¤¼ºÀÇ Ãø¸é¿¡¼­ ÀûÇÕÇÏÁö ¾ÊÀº ¹æ¹ýÀÌ´Ù. À̸¦ ÇØ°áÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¹æ¹ýÀ¸·Î´Â Cas9 ´Ü¹éÁúÀº ´Ü¹éÁú ÇüÅ·Î, sgRNA´Â RNA ÇüÅ·Π¼¼Æ÷¿¡ Àü´ÞÇÏ´Â DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀÌ ÀÖ´Ù. ´Ü¹éÁú°ú RNA´Â ¼¼Æ÷³»¿¡ Àü´ÞµÈ µÚ ªÀº ½Ã°£ ³»¿¡ ºÐÇØµÇ±â ¶§¹®¿¡ genome»óÀÇ ´Ù¸¥ ºÎºÐÀ» ¹Ù²ÙÁö ¾Ê°í ¿øÇÏ´Â À§Ä¡¸¸À» ¿£Áö´Ï¾î¸µ ÇÏ´Â È®·üÀÌ ³ô´Ù. ¶ÇÇÑ ¿Ü·¡ ´Ü¹éÁúÀÎ Cas9À» ¹ßÇö½Ã۱â À§ÇØ »ç¿ëÇÏ´Â ÇÁ·Î¸ðÅÍ¿Í ÄÚµ·ÀÇ ÃÖÀûÈ­ °úÁ¤ÀÌ ÇÊ¿äÄ¡ ¾Ê¾Æ ¼Õ½±°í °æÁ¦ÀûÀÎ ¹æ¹ýÀÌ´Ù.


º» ¿¬±¸¿¡¼­´Â Àü»çü ºÐ¼®±â¼ú°ú DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ºü¸£°í ÇÕ¸®ÀûÀÎ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¿£Áö´Ï¾î¸µ ±â¼úÀ» Á¦¾ÈÇÏ¿´´Ù. CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ °úÁ¤ ÁßÀÇ Àü»çü º¯È­¸¦ ÃßÀûÇÏ¿©, ¹ßÇö¾çÀÌ º¯È­ÇÏ´Â À¯ÀüÀÚµéÀ» ½ºÅ©¸®´× ÇØ³»¾ú°í DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» CHO ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡ ÃÖÃÊ·Î µµÀÔÇÏ¿©, ¹àÇô³½ À¯ÀüÀÚ¿Í Ç¥ÇöÇüÀÇ »ó°ü°ü°è¸¦ Áõ¸íÇÏ¿´´Ù.


±×¸² 1. º» ¿¬±¸¿¡¼­ Á¦¾ÈÇÑ Àü»çü ºÐ¼®±â¼ú°ú DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ

CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ ÇÕ¸®ÀûÀÎ ¿£Áö´Ï¾î¸µ °úÁ¤.  


2. ¿¬±¸°á°ú


ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ °úÁ¤¿¡¼­ÀÇ Àü»çü º¯È­¾ç»óÀ» »ìÆìº¸±â À§ÇÏ¿© ÀûÀÀ °úÁ¤ Áß ÃÑ 5°³ÀÇ ½ÃÁ¡¿¡¼­ ¼¼Æ÷¸¦ »ùÇøµÇϰí Strand-specific RNA sequencingÀ» ÁøÇàÇÏ¿´´Ù (±×¸²2A). ¾ò¾îÁø 1¾ï 8õ¸¸°³ÀÇ sequencing readµéÀ» CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ genome sequence¿¡ mapping½ÃŲ °á°ú 93% ÀÌ»óÀÇ readµéÀÌ ¼º°øÀûÀ¸·Î mappingµÇ´Â °ÍÀ» È®ÀÎÇÏ¿´À¸¸ç biological duplicate³¢¸®ÀÇ ÀçÇö¼ºµµ ¸Å¿ì ³ôÀ½À» È®ÀÎÇÏ¿´´Ù (±×¸²2B). °¢ À¯ÀüÀÚÀÇ ¹ßÇö¾çÀ» ¼öġȭ ÇÑ µÚ¿¡ 5°³ÀÇ ½ÃÁ¡¿¡ ´ëÇÏ¿© ¹ßÇö¾çÀÌ Áõ°¡ ¶Ç´Â °¨¼ÒÇÏ´Â À¯ÀüÀÚµéÀ» K-mean clustering ±â¹ýÀ¸·Î ±×·ìÈ­ ÇÏ¿´´Ù (±×¸²2C). °¢ ±×·ì¿¡ ´ëÇÏ¿© KEGG ´ë»ç°æ·Î ºÐ¼®À» ÁøÇàÇÑ °á°ú ¼¼Æ÷ »ýÀå, º¹Á¦, ÇÙ»ê ´ë»ç¿Í °ü·ÃµÈ ±×·ìµéÀº À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö¾çÀÌ Áõ°¡ÇÏ´Â °ÍÀ» È®ÀÎÇÏ¿´À¸¸ç, ¼¼Æ÷ ºÎÂø°ú Á÷Á¢ÀûÀ¸·Î °ü·ÃµÈ À¯ÀüÀÚµéÀº ¹ßÇö¾çÀÌ °¨¼ÒÇÏ´Â °ÍÀ» È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù (±×¸²2D). °á°úÀûÀ¸·Î Àü»çü ºÐ¼®À» ÅëÇÏ¿© ±âÀÛÀÌ ¹àÇôÁöÁö ¾ÊÀº ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ °úÁ¤¿¡¼­ ¾î¶°ÇÑ ±â´ÉÀ» °¡Áö´Â À¯ÀüÀÚµéÀÇ ¹ßÇö¾çÀÌ º¯È­ÇÏ¿´´ÂÁö¸¦ ºÐ¼®Çس¾ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù.

±×¸² 2. CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ ºÎÀ¯ ¹è¾ç ÀûÀÀ°úÁ¤ ÁßÀÇ Àü»çü º¯È­ ºÐ¼®. (A) CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ ºÎÀ¯ ¹è¾ç ÀûÀÀ °úÁ¤ÀÇ »ýÁ¸ °î¼± (B) RNA sequencing °á°úÀÇ ÀçÇö¼º ºÐ¼®. (C) K-mean clusteringÀ¸·Î ±×·ìÈ­ÇÑ ¹ßÇö¾çÀÌ Áõ°¡ ¶Ç´Â °¨¼ÒÇÏ´Â À¯ÀüÀÚµéÀÇ ¹ßÇö¾ç ºÐÆ÷µµ. (D) ¹ßÇö¾çÀÌ Áõ°¡ ¶Ç´Â °¨¼ÒÇÏ´Â À¯ÀüÀÚµéÀÌ ¼ÓÇØ ÀÖ´Â KEGG ´ë»ç°æ·Î.


ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀÀ» °¡¼ÓÈ­ ½Ãų ¼ö ÀÖ´Â À¯ÀüÀÚ È常¦ ¼±º°Çϱâ À§ÇÏ¿© ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀÀÌ ÁøÇàµÇ´Â µ¿¾È ¹ßÇö¾çÀÌ °¡Àå Å« ÆøÀ¸·Î °¨¼ÒÇÑ À¯ÀüÀÚ 5°³¸¦ ¼±º°ÇÏ¿´´Ù. Igfbp4, Sulf2, Fos, Aqp1, Nr4a1ÀÌ Å¸°ÙÀ¸·Î ¼±Á¤ µÇ¾úÀ¸¸ç ÀÌ À¯ÀüÀÚµéÀº ¾ÏÀÇ ¹ß»ý°ú °ü·ÃÀÌ ÀÖ´Â À¯ÀüÀÚµéÀÌ´Ù. CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ°úÁ¤ÀÇ Ç¥ÇöÇü º¯È­°¡ ¾ÏÀÇ ÀüÀ̰úÁ¤°ú ¸Å¿ì À¯»çÇϱ⠶§¹®¿¡ ÀÌ À¯ÀüÀÚµéÀÌ ÇÙ½ÉÀûÀÎ ¿ªÇÒÀ» ÇÒ °ÍÀÌ¶ó ¿¹»óÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù. ÀÌ À¯ÀüÀÚµéÀÇ ¿ªÇÒÀ» Áõ¸íÇϱâ À§ÇÏ¿© DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» CHO ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡ Àû¿ëÇÏ¿© °¢ À¯ÀüÀÚ knockoutÀ» ÁøÇàÇÏ¿´´Ù. Cas9 ´Ü¹éÁúÀ» E.coli¿¡¼­ ¹ßÇö½ÃŲ µÚ Ni-NTA bead¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© Á¤Á¦ÇÏ¿´°í, Ÿ°ÙÀ¸·Î ¼±Á¤ÇÑ ´Ù¼¸ °³ÀÇ À¯ÀüÀÚ¿¡ ´ëÇÏ¿© °¢ÀÚ sgRNA¸¦ µðÀÚÀÎÇϰí In vitro transcription ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© RNA ÇüÅ·ΠÁ¤Á¦ÇÏ¿´´Ù. Á¤Á¦µÈ Cas9 ´Ü¹éÁú°ú sgRNA¸¦ ¼¼Æ÷¿¡ ó¸®ÇØÁØ °á°ú, 39~54%ÀÇ È¿À²·Î Ÿ°ÙÇÏ´Â À¯ÀüÀÚ¸¦ knockoutÇϴµ¥ ¼º°øÇÏ¿´´Ù.

±×¸² 3. DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ °ü·Ã À¯ÀüÀÚ ¿£Áö´Ï¾î¸µ. (A) MA-plot ºÐ¼®±â¼úÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ °ü·Ã ¿£Áö´Ï¾î¸µ Ÿ°Ù À¯ÀüÀÚ ¼±Á¤. (B) 5°³ÀÇ ¼±Á¤µÈ Ÿ°Ù À¯ÀüÀÚ¿¡ ´ëÇÑ sgRNA µðÀÚÀÎ (C) In vitro¿¡¼­ DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛ ÀÛµ¿ ¿©ºÎ È®ÀÎ. (D) in vivo¿¡¼­ DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ 5°³ÀÇ À¯ÀüÀÚ¿¡ ´ëÇÑ genome ¿£Áö´Ï¾î¸µ °á°ú (E) 5°³ÀÇ À¯ÀüÀÚ¿¡ ´ëÇÑ µ¿½Ã´Ù¹ßÀû genome ¿£Áö´Ï¾î¸µ °á°ú (F) Bio analyzer¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ genome ¿£Áö´Ï¾î¸µ °á°ú Ãß°¡ È®ÀÎ.


Ÿ°Ù À¯ÀüÀÚ°¡ knockoutµÈ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®¸¦ ¹«Ç÷û¹èÁö¿¡¼­ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ½ÃŰ¸ç °¢ knockoutÀÌ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ ¼Óµµ¿¡ ¾î¶² ¿µÇâÀ» ³¢ÃÆ´ÂÁö È®ÀÎÇÏ¿´´Ù. ±× °á°ú ´Ù¼¸ °³ÀÇ À¯ÀüÀÚ Áß Igfbp4, Aqp1À» knockout½ÃŲ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®°¡ ~54%ÀÇ °¨¼ÒµÈ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ ½Ã°£À» º¸ÀÌ´Â °ÍÀ» È®ÀÎÇÏ¿´´Ù.



±×¸² 4. À¯ÀüÀÚ ¿£Áö´Ï¾î¸µÀ» ¿Ï·áÇÑ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®¸¦ ¹«Ç÷û¹èÁö¿¡¼­ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ ½ÃŲ °á°ú. (A) ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ ½Ã°£ÀÌ °¨¼ÒµÈ Igfbp4¿Í AqpI knockout CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ »ýÁ¸ °î¼±. (B) ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ ½Ã°£¿¡ ¿µÇâÀ» ³¢Ä¡Áö ¸øÇÑ Fos, Sulf2, Nr4a1 knockout CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ »ýÁ¸ °î¼±. (C) ´Ù¼¸ °³ÀÇ Å¸°Ù À¯ÀüÀÚ¸¦ µ¿½Ã´Ù¹ßÀûÀ¸·Î ¿£Áö´Ï¾î¸µÇÑ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ »ýÁ¸ °î¼±.


Ãß°¡ È®ÀÎÀ» À§ÇÏ¿© ´Ù¼¸ °³ÀÇ À¯ÀüÀÚ¿¡ ´ëÇÑ sgRNA¸¦ µ¿½Ã¿¡ ó¸®ÇÏ¿© ´Ù¾çÇÑ knockout Á¶ÇÕÀ» Æ÷ÇÔÇϰí ÀÖ´Â CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®¸¦ Á¦ÀÛÇÏ¿´´Ù. ÀÌ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀÀ» ½ÃµµÇÑ µÚ¿¡ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ ½ÃÀÛ ½ÃÁ¡°ú ¿Ï·á ½ÃÁ¡ÀÇ ¼¼Æ÷ÁÖ ±¸¼ºÀ» Â÷¼¼´ë ½ÃÄö½Ì ±â¹ÝÀÇ Targeted deep sequencing ±â¼ú·Î ºÐ¼®ÇÏ¿´´Ù. ±× °á°ú ´Ù¸¥ ¼¼ °³ÀÇ À¯ÀüÀÚ knockoutÀ» Æ÷ÇÔÇϰí ÀÖ´Â ¼¼Æ÷ÁÖ´Â ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀÀÌ ¿Ï·áµÊ¿¡ µû¶ó ±× ºñÀ²ÀÌ °¨¼ÒÇϰųª À¯ÁöµÇ¾úÁö¸¸ Igfbp4¿Í Aqp1ÀÌ kncokoutµÈ CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ ºñÀ²Àº Áõ°¡ÇÑ °ÍÀ» È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù. ÀÌ °á°ú´Â Igfbp4¿Í Aqp1ÀÇ knockoutÀÌ ½ÇÁ¦·Î CHO ¼¼Æ÷ÁÖÀÇ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ¿¡ È¿°ú¸¦ °¡Áø´Ù´Â °ÍÀ» ´Ù½Ã Çѹø º¸¿©ÁÖ¾ú´Ù.


±×¸² 5. 5°³ÀÇ À¯ÀüÀÚ¸¦ µ¿½Ã´Ù¹ßÀûÀ¸·Î ¿£Áö´Ï¾î¸µÇÑ

CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ °úÁ¤¿¡¼­ÀÇ ¼¼Æ÷ÁÖ ±¸¼º º¯È­.


3. ¿¬±¸ÀÇ ¼º°ú ¹× ÀÇÀÇ


ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀÀº Ä¡·á¿ë ´Ü¹éÁú ÀǾàǰÀÇ ´ë·® »ý»ê¿¡ À־ ÇʼöÀûÀÎ ´Ü°èÀÌ´Ù. º» ³í¹®¿¡¼­´Â Â÷¼¼´ë ½ÃÄö½Ì ±â¹ÝÀÇ RNA-seq ±â¼úÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ µ¿¾ÈÀÇ Àü»çü º¯È­¸¦ ¹àÇô³»¾ú´Ù. ±× °á°ú, ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ°úÁ¤¿¡¼­ »ýÀå°ú °ü·ÃµÈ À¯ÀüÀÚµéÀÇ ¹ßÇö¾çÀº Áõ°¡ÇÏ´Â °ÍÀ¸·Î È®ÀεǾúÀ¸¸ç, ¼¼Æ÷ºÎÂø¿¡ °ü·ÃµÈ À¯ÀüÀÚµéÀº ¹ßÇö¾çÀÌ °¨¼ÒÇÏ´Â °ÍÀ» ½Ã½ºÅÛÀûÀÎ ·¹º§¿¡¼­ È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù. ¹ßÇö¾çÀÌ º¯È­ÇÏ´Â À¯ÀüÀÚµé Áß ¹ßÇö¾çÀÌ °¡Àå ¸¹ÀÌ °¨¼ÒÇÏ´Â 5°³ÀÇ À¯ÀüÀÚ¸¦ ¿£Áö´Ï¾î¸µ Ÿ°ÙÀ¸·Î ¼±Á¤ÇÏ¿´À¸¸ç DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» Àû¿ë½ÃÄÑ °¢ À¯ÀüÀÚ¿¡ ´ëÇÑ knockoutÀ» ÁøÇàÇÏ¿´´Ù. 39%-54%ÀÇ ³ôÀº È¿À²·Î ¿£Áö´Ï¾î¸µÀÌ µÊÀ» È®ÀÎÇÏ¿´À¸¸ç, ¿£Áö´Ï¾î¸µµÈ CHO ¼¼Æ÷ÁÖ ¶óÀ̺귯¸®¸¦ ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀ½ÃÄÑ º» °á°ú, Igfbp4¿Í Aqp1À¯ÀüÀÚ°¡ knockout µÈ °æ¿ì ºÎÀ¯¹è¾ç ÀûÀÀÀÌ °¡¼ÓÈ­ µÈ´Ù´Â °ÍÀ» ÃÖÁ¾ È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù. ÀÌ ¿¬±¸¸¦ ÅëÇÏ¿© ¿øÇϴ ǥÇöÇüÀ» °¡Áö´Â CHO ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ Á¦ÀÛÇÏ´Â ÇÕ¸®ÀûÀÎ ¿£Áö´Ï¾î¸µ Ç÷§Æû ±â¼úÀ» ±¸ÃàÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù. ¾Ë·ÁÁöÁö ¾ÊÀº ±âÀÛÀ¸·ÎºÎÅÍ ¿£Áö´Ï¾î¸µ Èĺ¸ À¯ÀüÀÚµéÀ» ¹ß±¼ ÇØ³»°í ½ÇÁ¦ ¿£Áö´Ï¾î¸µ È¿°ú±îÁö °ËÁõÇÑ ÀÌ Ç÷§Æû ±â¼úÀº CHO ¼¼Æ÷ÁÖ »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó ´Ù¾çÇÑ ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡µµ ½±°Ô Àû¿ë °¡´ÉÇϸç, ÇâÈÄ °íǰÁúÀÇ ´Ü¹éÁú ÀǾàǰÀ» °í»ý»êÇÏ´Â CHO ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ °³¹ßÇϴµ¥ Å©°Ô ±â¿©ÇÒ °ÍÀ̶ó°í »ý°¢ÇÑ´Ù.


Âü°í¹®Çå
1. Xu, X., Nagarajan, H., Lewis, N. E., Pan, S., Cai, Z., Liu, X., Chen,W., Xie, M., Wang, W., Hammond, S., Andersen, M. R., Neff, N.,Passarelli, B., Koh, W., Fan, H. C., Wang, J., Gui, Y., Lee, K. H.,Betenbaugh, M. J., Quake, S. R., Famili, I., Palsson, B. O., and Wang, J.(2011) The genomic sequence of the Chinese hamster ovary (CHO)-K1 cell line. Nat. Biotechnol. 29, 735?741.
2. Lewis, N. E., Liu, X., Li, Y., Nagarajan, H., Yerganian, G., O¡¯Brien,E., Bordbar, A., Roth, A. M., Rosenbloom, J., Bian, C., Xie, M., Chen,W., Li, N., Baycin-Hizal, D., Latif, H., Forster, J., Betenbaugh, M. J.,Famili, I., Xu, X., Wang, J., and Palsson, B. O. (2013) Genomiclandscapes of Chinese hamster ovary cell lines as revealed by theCricetulus griseus draft genome. Nat. Biotechnol. 31, 759?765.
3. Baik, J., Ha, T., Kim, Y., and Lee, G. (2011) Proteomicunderstanding of intracellular responses of recombinant chinesehamster ovary cells adapted to grow in serum-free suspension culture.Biotechnol. Prog. 27, 1680?1688.
4. Ronda, C., Pedersen, L. E., Hansen, H. G., Kallehauge, T. B.,Betenbaugh, M. J., Nielsen, A. T., and Kildegaard, H. F. (2014)Accelerating genome editing in CHO cells using CRISPR Cas9 andCRISPy, a web-based target finding tool. Biotechnol. Bioeng. 111,1604?1616.
5. Sander, J. D., and Joung, J. K. (2014) CRISPR-Cas systems forediting, regulating and targeting genomes. Nat. Biotechnol. 32, 347?355.










Total:45 page:(3/2)
29 Á¤º¸ ISBC »ý¹° ģȭÀûÀÎ Fe2O3 ¿äÅ©½© ÀÔÀÚÀÇ ´ë±Ô¸ð ¿¡¾î.. 18.09.04 3505
28 Á¤º¸ ISBC Ç×»ýÁ¦ »ý»ê ÃÖÀûÈ­¸¦ À§ÇÑ ¹æ¼±±Õ À¯ÀüÀû µµ±¸ .. 18.09.04 2946
27 Á¤º¸ ISBC Àúºñ¿ë °íÈ¿À² ¸ÂÃãÇü ¹Ì»ý¹° °Ë»ö Ç÷§Æû °³¹ß 18.09.04 5883
26 Á¤º¸ ISBC ÄÚ¸®³×¹ÚÅ׸®¿ò ±Û·çŸ¹ÌÄñ¿¡¼­ Çì¹Ì¼¿·ê·Î¿À½º .. 18.09.04 4259
25 Á¤º¸ ISBC Ç×»ýÁ¦ »ýÇÕ¼º ¹æ¼±±Õ À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö Á¶Àý ±Ô¸í 18.09.04 3268
24 Á¤º¸ ISBC NK cell¿¡¼­ NF-¥êBÀÇ ´Ü°èÀû ÀλêÈ­¿Í Á¶ÀýÀ» Åë.. 18.09.04 4021
23 Á¤º¸ ISBC Cross linker¸¦ ÅëÇØ ¾ÈÁ¤È­µÇ´Â À¶ÇÕ ¾ËÆÄÇ︯½º.. 18.09.04 4474
22 Á¤º¸ ISBC Àü»çü ºÐ¼®°ú DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ .. 18.09.04 4760
21 Á¤º¸ ISBC Antisense RNA ±â¹Ý Á¤Á·¼öÀÎ½Ä Â÷´ÜÈ¿¼Ò °í¼Ó´Ù.. 18.08.30 3984
20 Á¤º¸ ISBC À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö ÆÐÅÏÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ¾à¹°Ç¥ÀûÀûÇÕ¼ºÀÇ °³.. 18.08.30 4091
19 Á¤º¸ ISBC ´ç °¨Áö °í°¨µµ FRET ´Ü¹éÁú ¼¾¼­ ¹× ¼ÒÇü °¨Áö .. 18.08.30 5004
18 Á¤º¸ ISBC ´ëÀå±Õ ÃÑÀ¯Àüü³»ÀÇ ArgR Àü»çÀÎÀÚ¿Í DNA °áÇÕü.. 18.08.30 3618
17 Á¤º¸ ISBC Á¾¾ç Ç÷°üÀÇ ½Å»ý°ú ÁøÇàÀ» È¿À²ÀûÀ¸·Î ¾ïÁ¦ÇÏ´Â .. 18.08.30 4093
16 Á¤º¸ ISBC Æ÷À¯¼¼Æ÷¿¡¼­ CRISPR Àü»ç ¾ïÁ¦ ÀåÄ¡¿Í À¯ÀüÀÚ È¸.. 18.08.30 3213
15 Á¤º¸ ISBC ¾ËÄÚ¿Ã ºÐÇØÈ¿¼Ò III (Alcohol Dehydrogenase III.. 18.08.30 3800
14 Á¤º¸ ISBC FACS ±â¹ÝÀÇ ÇÕ¼º Àΰ£ Ç×ü Ãʰí¼Ó ¹ß±¼ ½Ã½ºÅÛ .. 18.08.30 4560
[1] [2] [3]