¿ÞÂÊ ¸Þ´º ŸÀÌƲ À̹ÌÁö
Áֿ伺°ú

Home < Áֿ伺°ú < Áֿ伺°ú

       FACS ±â¹ÝÀÇ ÇÕ¼º Àΰ£ Ç×ü ÃÊ°í¼Ó ¹ß±¼ ½Ã½ºÅÛ ±¸Ãà
               
       ISBC        2018.08.30 15:07        3713
 

FACS ±â¹ÝÀÇ ÇÕ¼º Àΰ£ Ç×ü ÃÊ°í¼Ó ¹ß±¼ ½Ã½ºÅÛ ±¸Ãà


Çѱ¹°úÇбâ¼ú¿ø Á¤±âÁØ ±³¼ö


Rapid Isolation of Antibody from a Synthetic Human Antibody Library by Repeated Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS) / PLOS One [Accepted]


1. ¿¬±¸¹è°æ


ÀÎü ³»¿¡¼­ Ç×ü´Â ¿ÜºÎ·ÎºÎÅÍ µé¾î¿À´Â Ç׿ø°ú °áÇÕÇÏ¿© Ç׿øÀÇ ÀÛ¿ëÀ» ¹æÇØÇϰųª, Ç׿øÀ» Á¦°ÅÇÏ´Â ¸é¿ª´Ü¹éÁúÀ̸ç, Ç×üÀÇ ÀÌ·¯ÇÑ ¼ºÁúÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¸é ¸é¿ª¼¼Æ÷ ½ÅÈ£Àü´Þ ü°è¿¡ °ü¿©ÇÏ´Â ´Ü¹éÁú Ç׿ø, ¾Ï¼¼Æ÷ Ç¥¸é¿¡¼­ ¹ßÇöµÇ´Â Ç¥ÁöÀÎÀÚ, ¶Ç´Â À¯ÇØ ¹ÙÀÌ·¯½º Ç¥¸éÀÇ Ç¥ÁöÀÎÀÚ µîÀ» Ç¥ÀûÀ¸·Î ÇÏ´Â ´ÜŬ·ÐÇ×ü¸¦ Á¦ÀÛÇÏ¿© Áúº´ÀÇ Ä¡·á ȤÀº Áø´Ü¿¡ ÀÌ¿ëÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù [1, 2]. ¿øÇÏ´Â Ç׿øÀ» Ç¥ÀûÀ¸·Î ÇÏ´Â ´ÜŬ·ÐÇ×üÀÇ È¿°úÀûÀÎ °³¹ßÀ» À§ÇØ ¹ÚÅ׸®¿ÀÆÄÁö¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ÆÄÁö µð½ºÇ÷¹ÀÌ ½Ã½ºÅÛ, ´ëÀå±Õ ȤÀº È¿¸ðÀÇ ¼¼Æ÷ Ç¥¸é µð½ºÇ÷¹ÀÌ ½Ã½ºÅÛ, ±×¸®°í ¸®º¸¼Ø µð½ºÇ÷¹ÀÌ ½Ã½ºÅÛ µîµî ´Ù¾çÇÑ ´Ü¹éÁú°øÇÐ ±â¼úµéÀÌ °³¹ßµÇ¾î ÀÌ¿ëµÇ¾î ¿Ô´Ù [3, 4]. ÇÏÁö¸¸ ÇöÀç±îÁö °³¹ßµÈ ±â¼úµéÀÇ ´ëºÎºÐÀº ¶óÀ̺귯¸®·ÎºÎÅÍ ¿øÇÏ´Â Ç×ü¸¦ ¹ß±¼Çϱâ À§ÇØ ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ ¹Ýº¹µÈ ½ºÅ©¸®´×À» ÇÊ¿ä·Î Çϱ⠶§¹®¿¡ Ç×ü ¹ß±¼¿¡´Â ÃÖ¼Ò ¼ö ÀÏ¿¡¼­ ¼ö ÁÖ±îÁö ½Ã°£ÀÌ °É¸®°Ô µÇ°í, ¹ÙÀÌ·¯½º¸¦ ÅëÇØ ±Þ¼Óµµ·Î ¹øÁö´Â Àΰ£ ¶Ç´Â °¡Ãà Áúº´¿¡ ´ëÇؼ­´Â Àû½Ã¿¡ ´ëó¸¦ Çϱ⿡ ¸Å¿ì ¾î·Æ´Ù´Â ´ÜÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù. ÀÌ¿¡ º» ¿¬±¸ÁøÀº Ç×ü ¶óÀ̺귯¸® ½ºÅ©¸®´×¿¡ ¼Ò¿äµÇ´Â ½Ã°£À» ´ÜÃàÇÏ°íÀÚ º» ¿¬±¸¸¦ ½ÃÀÛÇÏ°Ô µÇ¾ú´Ù [5].


2. ¿¬±¸°á°ú


±âÁ¸ ¹Ì»ý¹°À» ÅëÇÑ Ç×ü ¶óÀ̺귯¸® ½ºÅ©¸®´×Àº º¸Åë ´ÙÀ½°ú °°Àº ´Ü°è·Î ¼öÇàÀÌ µÈ´Ù (±×¸² 1). i) ¶óÀ̺귯¸® ¼¼Æ÷ÀÇ ¹è¾ç ´Ü°è; ii) Çü±¤¿°·á°¡ ºÙÀº ¸ñÇ¥ Ç׿ø°ú ¶óÀ̺귯¸® ¼¼Æ÷ÀÇ ¹ÝÀÀ ´Ü°è; iii) Çü±¤È°¼º ¼¼Æ÷ ºÐ·ù±â (FACS)¸¦ ÅëÇÑ ½ºÅ©¸®´× ´Ü°è; iv) ½ºÅ©¸®´×À» ÅëÇØ ºÐ·ùµÈ ¶óÀ̺귯¸® ¼¼Æ÷ÀÇ Àç»ý; v) ÃÖÁ¾ Ç×ü°¡ ¾ò¾îÁú ¶§±îÁö i ´Ü°èºÎÅÍ ¹Ýº¹[6].


±×¸² 1. Ç×ü ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ »õ·Î¿î FACS ±â¹Ý ½ºÅ©¸®´× Àü·« ¸ð½Äµµ.


ÀÌ °úÁ¤ Áß¿¡¼­ °¡Àå ¸¹Àº ½Ã°£ÀÌ ¼Ò¿äµÇ´Â °úÁ¤Àº iv ´Ü°èÀÇ ¶óÀ̺귯¸® ¼¼Æ÷ÀÇ Àç»ý °úÁ¤Àε¥, ÇöÀç ³Î¸® »ç¿ëµÇ´Â ´ëºÎºÐÀÇ ½ºÅ©¸®´× Àü·«¿¡¼­´Â ÀϹÝÀûÀ¸·Î FACS ½ºÅ©¸®´× ÀÌÈÄ¿¡ ºÐ·ùµÈ ¼¼Æ÷¸¦ ´Ù½Ã Å°¿ì°Å³ª (ÃÖ¼Ò ÇÏ·ç ¼Ò¿ä), ºÐ·ùµÈ ¼¼Æ÷°¡ °¡Áø Ç×ü À¯ÀüÀÚ¸¦ ¾ò¾î¼­ ´Ù½Ã Ŭ·Î´×ÇÏ´Â (ÃÖ¼Ò 3~4ÀÏ ¼Ò¿ä) ¹æ¹ýÀ¸·Î ¼öÇàÇϱ⠶§¹®ÀÌ´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ ¹®Á¦¸¦ ÇØ°áÇÏ°íÀÚ º» ¿¬±¸ÁøÀº ºÐ·ùµÈ ¶óÀ̺귯¸® ¼¼Æ÷¸¦ Àç»ý °úÁ¤ ¾øÀÌ ¿¬¼ÓÇؼ­ FACS ½ºÅ©¸®´×À» ¹Ýº¹ÇÏ´Â Àü·«À¸·Î ´Ü ÇÏ·ç¿¡ ¸ðµç FACS ½ºÅ©¸®´× °úÁ¤À» ³¡³¾ ¼ö ÀÖµµ·Ï ½ÇÇèÀ» ¼öÇàÇÏ¿´°í (±×¸² 1), ±× °á°ú H1N1 ÀÎÇ÷翣ÀÚ ¹ÙÀÌ·¯½º, BÇü °£¿° ¹ÙÀÌ·¯½º ±×¸®°í ±¸Á¦¿ª ¹ÙÀÌ·¯½ºÀÇ Ç¥¸é Ç׿øµé¿¡ ´ëÇؼ­ È°¼ºÀÌ ¸Å¿ì ³ôÀº (KD=~¼ö½Ê nM) Ç×üµéÀ» °¢°¢ ´Ü ÇÏ·çÀÇ FACS ½ºÅ©¸®´×À» ÅëÇؼ­ ¹ß±¼ÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú´Ù (±×¸² 2). ƯÈ÷ ±¸Á¦¿ª ¹ÙÀÌ·¯½º Ç¥¸é Ç׿øÀÎ VP1¿¡ ´ëÇؼ­ ¹ß±¼ÇÑ Ç×ü´Â ½ÇÁ¦ ±¸Á¦¿ª ¹ÙÀÌ·¯½º¿¡ ´ëÇؼ­µµ Å« È°¼ºÀ» º¸¿©ÁÖ¾ú´Ù (±×¸² 3).


±×¸² 2. H1N1 ÀÎÇ÷翣ÀÚ ¹ÙÀÌ·¯½ºÀÇ N1 Ç¥¸é Ç׿ø¿¡ ´ëÇÑ Ç×ü ½ºÅ©¸®´×. (A) FACS ½ºÅ©¸®´× µ¥ÀÌÅÍ. ¿À¸®Áö³Î ¶óÀ̺귯¸®, 1st sorted¶óÀ̺귯¸®, 2nd sorted¶óÀ̺귯¸®, 3rd sorted¶óÀ̺귯¸® ±×¸®°í 4th sorted¶óÀ̺귯¸®´Â »¡°£»ö, ÁÖȲ»ö, ÃÊ·Ï»ö, ÆĶõ»ö ±×¸®°í º¸¶ó»ö ¼±À¸·Î Ç¥½ÃµÇ¾ú´Ù. (B) ¸é¿ªÈíÂø¹ÝÀÀ°Ë»ç¸¦ ÅëÇÑ ÃÖÁ¾ÀûÀ¸·Î ºÐ·ùµÈ ¶óÀ̺귯¸®ÀÇ °³º° Ŭ·Ð ºÐ¼®. °ËÀº»ö ¸·´ë´Â Negative controlÀÇ BSA°¡ ÄÚÆÃµÈ well¿¡¼­ÀÇ °ª, ȸ»ö ¸·´ë´Â GST¿¡ À¶ÇÕµÈ N1 Ç¥¸é Ç׿øÀÌ ÄÚÆÃµÈ well¿¡¼­ÀÇ °ª. (C) Á¤Á¦µÈ Ç×ü¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ¸é¿ªÈíÂø¹ÝÀÀ°Ë»ç. µ¿±×¶ó¹Ì: S1, ³×¸ð: S5, ¼¼¸ð: S16. ÇÏ¾á µµÇüÀº Negative control BSA°¡ ÄÚÆÃµÈ well¿¡¼­ÀÇ °ª. °ËÀº µµÇüÀº GST¿¡ À¶ÇÕµÈ N1 Ç¥¸é Ç׿øÀÌ ÄÚÆÃµÈ well¿¡¼­ÀÇ °ª.


3. ¿¬±¸ÀÇ ¼º°ú ¹× ÀÇÀÇ


ÇöÀç±îÁö ÀÌ¿ëµÇ¾î ¿Â Ç×ü ¶óÀ̺귯¸® ½ºÅ©¸®´× °úÁ¤Àº ºÐ·ùµÈ ¶óÀ̺귯¸® ¼¼Æ÷ÀÇ Àç»ý ´Ü°è ¶§¹®¿¡ »ó´ëÀûÀ¸·Î ¿À·£ ½Ã°£ÀÌ °É·Á¼­ Àü¿°¼ºÀÌ ¸Å¿ì °­ÇÑ ¹ÙÀÌ·¯½º Áúº´¿¡ ´ëÇÑ Ä¡·á ȤÀº Áø´Ü Ç×ü¸¦ ¹ß±¼ÇÏ´Â µ¥¿¡ ºÒ¸®ÇÔÀÌ ÀÖ¾ú´Ù. ±×·¯³ª º» ¿¬±¸ÁøÀº À̹ø ¿¬±¸ °á°ú¸¦ ÅëÇØ ºÐ·ùµÈ ¶óÀ̺귯¸® ¼¼Æ÷ÀÇ Àç»ý ´Ü°è ¾øÀÌ ¿¬¼ÓµÈ FACS ½ºÅ©¸®´×À» ÅëÇØ ³ôÀº È°¼ºÀÇ Ç×ü ¹ß±¼ÀÌ °¡´ÉÇÔÀ» º¸¿´À¸¸ç, À̸¦ ÅëÇØ ¹ß±¼µÈ Ç×ü°¡ ½ÇÁ¦ ¹ÙÀÌ·¯½º¿¡ ´ëÇؼ­µµ Á¦´ë·Î ¿ªÇÒÀ» ÇÏ´Â °Í±îÁö Áõ¸íÇÏ¿´´Ù. º» ¿¬±¸¸¦ ÅëÇؼ­ ±¸ÃàµÈ ÃÊ°í¼Ó Ç×ü ¶óÀ̺귯¸® FACS ½ºÅ©¸®´× ¹æ¹ýÀº ¹ÙÀÌ·¯½º Áúº´ È®»ê°ú °°ÀÌ ½Ã±ÞÈ÷ Ç×ü°¡ ÇÊ¿äÇÑ ½ÃÁ¡¿¡ ±²ÀåÈ÷ À¯¿ëÇÑ Ç×ü °³¹ß Àü·«ÀÌ µÉ °ÍÀ¸·Î ¿¹»óÇÑ´Ù.

±×¸² 3. ºñÈ°¼ºµÈ ½ÇÁ¦ ±¸Á¦¿ª ¹ÙÀÌ·¯½º°¡ ÄÚÆÃµÈ kit¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ¸é¿ªÈíÂø¹ÝÀÀ°Ë»ç. µ¿±×¶ó¹Ì: SV7 (±¸Á¦¿ª ¹ÙÀÌ·¯½º Ç׿ø¿¡ ´ëÇؼ­ ½ºÅ©¸®´×ÇÏ¿© ¹ß±¼ÇÑ Ç×ü), ¼¼¸ð: Negative control Ç×ü.


Âü°í¹®Çå
1. Ç×üÀǾàÇ° °³¹ß ÇöȲ º¸°í¼­. 2013 Çѱ¹ ¹ÙÀÌ¿À °æÁ¦ ¿¬±¸¼¾ÅÍ.
2. Beck A, Wurch T, Bailly C, Corvaia N. 2010. Strategies and challenges for the next generation of therapeutic antibodies. Nat Rev Immunol 10:345-352.
3. Boder ET, Wittrup KD (1997) Yeast surface display for screening combinatorial polypeptide libraries. Nat Biotechnol 15:553-557.
4. Fushs P, Breitling F, Dübel S, Seehaus T, Little M. 1991. Targeting recombinanat antibodies to the surface of E. coli: Fusion to a peptidoglycan associated lipoprotein. Biotechnology 9:1369-1372.
5. Yim SS, Bang HB, Kim YH, Lee YJ, Jeong GM, Jeong KJ. 2014. Rapid isolation of antibody from a synthetic human antibody library by repeated fluorescence-activated cell sorting (FACS). PLOS One [Accepted].
6. Hoogenboom HR. 2005. Selecting and screening recombinant antibody libraries. Nat Biotechnol 23:1105-1116.




Total:45 page:(3/2)
29 Á¤º¸ ISBC »ý¹° ģȭÀûÀÎ Fe2O3 ¿äÅ©½© ÀÔÀÚÀÇ ´ë±Ô¸ð ¿¡¾î.. 18.09.04 2712
28 Á¤º¸ ISBC Ç×»ýÁ¦ »ý»ê ÃÖÀûÈ­¸¦ À§ÇÑ ¹æ¼±±Õ À¯ÀüÀû µµ±¸ .. 18.09.04 2230
27 Á¤º¸ ISBC Àúºñ¿ë °íÈ¿À² ¸ÂÃãÇü ¹Ì»ý¹° °Ë»ö Ç÷§Æû °³¹ß 18.09.04 5080
26 Á¤º¸ ISBC ÄÚ¸®³×¹ÚÅ׸®¿ò ±Û·çŸ¹ÌÄñ¿¡¼­ Çì¹Ì¼¿·ê·Î¿À½º .. 18.09.04 3276
25 Á¤º¸ ISBC Ç×»ýÁ¦ »ýÇÕ¼º ¹æ¼±±Õ À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö Á¶Àý ±Ô¸í 18.09.04 2457
24 Á¤º¸ ISBC NK cell¿¡¼­ NF-¥êBÀÇ ´Ü°èÀû ÀλêÈ­¿Í Á¶ÀýÀ» Åë.. 18.09.04 3052
23 Á¤º¸ ISBC Cross linker¸¦ ÅëÇØ ¾ÈÁ¤È­µÇ´Â À¶ÇÕ ¾ËÆÄÇ︯½º.. 18.09.04 3558
22 Á¤º¸ ISBC Àü»çü ºÐ¼®°ú DNA-free CRISPR ½Ã½ºÅÛÀ» ÀÌ¿ëÇÑ .. 18.09.04 3803
21 Á¤º¸ ISBC Antisense RNA ±â¹Ý Á¤Á·¼öÀÎ½Ä Â÷´ÜÈ¿¼Ò °í¼Ó´Ù.. 18.08.30 3130
20 Á¤º¸ ISBC À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö ÆÐÅÏÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ¾à¹°Ç¥ÀûÀûÇÕ¼ºÀÇ °³.. 18.08.30 3035
19 Á¤º¸ ISBC ´ç °¨Áö °í°¨µµ FRET ´Ü¹éÁú ¼¾¼­ ¹× ¼ÒÇü °¨Áö .. 18.08.30 4061
18 Á¤º¸ ISBC ´ëÀå±Õ ÃÑÀ¯Àüü³»ÀÇ ArgR Àü»çÀÎÀÚ¿Í DNA °áÇÕü.. 18.08.30 2691
17 Á¤º¸ ISBC Á¾¾ç Ç÷°üÀÇ ½Å»ý°ú ÁøÇàÀ» È¿À²ÀûÀ¸·Î ¾ïÁ¦ÇÏ´Â .. 18.08.30 3278
16 Á¤º¸ ISBC Æ÷À¯¼¼Æ÷¿¡¼­ CRISPR Àü»ç ¾ïÁ¦ ÀåÄ¡¿Í À¯ÀüÀÚ È¸.. 18.08.30 2398
15 Á¤º¸ ISBC ¾ËÄÚ¿Ã ºÐÇØÈ¿¼Ò III (Alcohol Dehydrogenase III.. 18.08.30 2922
14 Á¤º¸ ISBC FACS ±â¹ÝÀÇ ÇÕ¼º Àΰ£ Ç×ü ÃÊ°í¼Ó ¹ß±¼ ½Ã½ºÅÛ .. 18.08.30 3714
[1] [2] [3]