¿ÞÂÊ ¸Þ´º ŸÀÌƲ À̹ÌÁö
¿¬±¸µ¿Çâ

Home < ¿­¸°¸¶´ç < ¿¬±¸µ¿Çâ

       »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ´ë·®»ý»ê ¹× ½Ç¿ëÈ­¿¡ ´ëÇÑ ÃÖ±Ù ¿¬±¸µ¿Çâ
       kimsg7596@kaistac.kr        
       Á¶ÁÖÇö ±³¼ö        2015.02.25 10:15        19156
´Ù¿î·Îµå : »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ´ë·®»ý»ê ¹× ½Ç¿ëÈ­¿¡ °üÇÑ ÃÖ±Ù ¿¬±¸ µ¿Çâ-°æ»ó´ë_Á¶ÁÖÇö.pdf(463 Kb)
 

»ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ´ë·®»ý»ê ¹× ½Ç¿ëÈ­¿¡ ´ëÇÑ ÃÖ±Ù ¿¬±¸µ¿Çâ

                                                                                                                               

                                                                                                                                  °æ»ó´ëÇб³ Á¶ÁÖÇö ±³¼ö

 

1. °³¿ä
Ç×»ýÁ¦ ³»¼º±ÕÀÇ ±Þ°ÝÇÑ Áõ°¡·Î ÀÎÇØ Ç×»ýÁ¦ °³¹ßÀÇ Çʿ伺ÀÌ Áõ´ëµÇ´Âµ¥µµ ºÒ±¸ÇÏ°í ±×µ¿¾È ½Å±Ô Ç×»ýÁ¦ °³¹ßÀº ´õµð°Ô ÀÌ·ç¾îÁ® ¿Ô´Ù. Áö³­ 40¿© ³â°£ »õ·Î Ãâ½ÃµÈ Ç×»ýÁ¦´Â oxazolidinone°è¿­¿¡ ¼ÓÇÏ´Â linezolid(ÀÚÀ̺¹½º, Pfizer), cyclic lipopeptide°èÀÇ daptomycin(Å¥ºñ½Å, Cubist pharmaceutical) µî 4Á¾¿¡ ºÒ°úÇÏ´Ù(Song, 2012). ¶ÇÇÑ ÇöÀç °³¹ßÀÌ ÁøÇà ÁßÀÎ Ç×»ýÁ¦µéµµ ´ëºÎºÐ ±âÁ¸ Ç×»ýÁ¦¿Í À¯»çÇÑ ÀÛ¿ë±âÀÛÀ» °¡Á® Áö¼ÓÀûÀÎ Ç×»ýÁ¦ ³»¼º ¹®Á¦¸¦ À¯¹ßÇÒ ¼ö¹Û¿¡ ¾øÀ¸¸ç, ºñƯÀÌÀûÀÎ Ç×±ÕÀÛ¿ëÀ¸·Î ÀÎÇØ Ã¼³» Á¤»ó¼¼±ÕÃÑ(normal flora)À» Æı«ÇÏ¿© ÀÌÂ÷°¨¿°À» À¯¹ßÇÏ´Â µîÀÇ ¹®Á¦¸¦ °¡Áø´Ù. µû¶ó¼­ ±âÁ¸ÀÇ Ç×»ýÁ¦¿Í´Â ´Ù¸¥ ÀÛ¿ë±âÀÛÀ» °¡Áö´Â µ¿½Ã¿¡ º´¿ø±Õ¿¡¸¸ ƯÀÌÀûÀÎ Ç×»ýÀÛ¿ëÀ» ³ªÅ¸³¾ ¼ö ÀÖ´Â »õ·Î¿î Æз¯´ÙÀÓÀÇ °¨¿° Ä¡·áÁ¦ÀÇ °³¹ßÀÌ Àý½ÇÇÑ ½ÇÁ¤ÀÌ´Ù.
ÃÖ±Ù µé¾î ±âÁ¸ Ç×»ýÁ¦ÀÇ ¹®Á¦Á¡À» ÇØ°áÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ´ë¾ÈÀ¸·Î »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å(host defense peptide, HDP)°¡ ÁÖ¸ñ¹Þ°í ÀÖ´Ù. »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å´Â ÀÚ¿¬¸é¿ªÃ¼°è(innate immune system)ÀÇ ÀÏ¿øÀ¸·Î ¸ðµç »ý¹°Ã¼°¡ °¡Áö°í ÀÖ´Â 10-50°³ÀÇ ¾Æ¹Ì³ë»êÀ¸·Î ±¸¼ºµÈ ÀÛÀº Å©±âÀÇ ÆéŸÀ̵å·Î¼­ »ý¹°Ã¼°¡ º´¿ø±Õ¿¡ °¨¿°µÇ¾úÀ» ¶§ 1Â÷ ¹æ¾î¹°Áú·Î ÀÛ¿ëÇÑ´Ù(Zasloff, 2002). À̵éÀº ÁÖ·Î ¾çÀüÇÏ(+2~+9)¸¦ ¶ì¸ç, 30% Á¤µµÀÇ ¼Ò¼ö¼º ¾Æ¹Ì³ë»ê Àܱ⸦ Æ÷ÇÔÇÏ°í Àִµ¥, ÀÌ·¯ÇÑ Æ¯Â¡À¸·Î ÀÎÇØ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å´Â À½ÀüÇϸ¦ ¶í ¼¼±Õ ¼¼Æ÷¸·°ú Á¢ÃËÇÏ°Ô µÇ¸é ¾çÄ£¼º ¥á-³ª¼±±¸Á¶(amphipathic ¥á-helix) ȤÀº ¥â-º´Ç³±¸Á¶(¥â-sheet)¸¦ Çü¼ºÇÏ¿© ¼¼Æ÷¸· ¼ÓÀ¸·Î ³¢¾î µé¾î°¡ ¼¼Æ÷¸·ÀÇ ÀüÀ§¸¦ º¯È­½ÃÅ°°Å³ª ¼¼Æ÷¸· ÀÚü¿¡ ±¸¸ÛÀ» ³»¾î ¼¼Æ÷¸·À» Æı«ÇÔÀ¸·Î½á ¼¼±ÕÀ» Á×ÀÌ´Â °ÍÀ¸·Î ¾Ë·ÁÁ® ÀÖ´Ù. µû¶ó¼­ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å´Â ƯÁ¤ ¼ö¿ëü¸¦ Ÿ°ÙÀ¸·ÎÇÏ´Â ±âÁ¸ÀÇ Ç×»ýÁ¦¿¡ ºñÇØ ³»¼º À¯¹ß°¡´É¼ºÀÌ ÇöÀúÈ÷ ³·´Ù. ÀÌ¿Í ´õºÒ¾î »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å´Â ½Å¼ÓÇÑ ÀÛ¿ë ±âÀü, ±âÁ¸ Ç×»ýÁ¦ ³»¼º±Õ¿¡ ÀÛ¿ë, Ç× ³»µ¶¼º(anti-endotoxicity) µîÀÇ Æ¯Â¡À» °¡Áö°í ÀÖ¾î Â÷¼¼´ë Ç×»ýÁ¦·Î¼­ °³¹ßÀÌ ÀûÇÕÇÏ´Ù(Hancock & Sahl, 2006).
½ÇÁ¦·Î hLF1-11(lactoferricin À¯µµÃ¼), iseganan(protegrin À¯µµÃ¼), omiganan(indolicidin À¯µµÃ¼) µîÀÇ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 Ç×»ýÁ¦ ´ëü¹°Áú·Î °³¹ßÇÏ·Á´Â ½Ãµµ°¡ Áö³­ 10³â°£ ²ÙÁØÈ÷ ÀÖ¾î ¿Ô´Ù(Ç¥1). ÇÏÁö¸¸ ´ë´Ù¼öÀÇ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åµéÀº »ý¸®Àû ¿°³óµµ(physiological salt concentration)¿¡¼­ ºÒÈ°¼ºÈ­µÇ¸ç, Ç÷û°ú ¼ÒÈ­°ü ³»¿¡ Á¸ÀçÇÏ´Â ´Ü¹éÁú ºÐÇØÈ¿¼Ò¿¡ ÀÇÇØ ºü¸£°Ô ºÐÇصDZ⠶§¹®¿¡ Ç¥Àû ±â°üÀ¸·ÎÀÇ Àü´Þ/Ç¥Àû ±â°ü¿¡¼­ÀÇ ÀÛ¿ëÀÌ ¾î·Á¿î ¹®Á¦Á¡ÀÌ ÀÖ´Ù. ¶ÇÇÑ ¹«¾ùº¸´Ùµµ È­ÇÐÇÕ¼º(solid-phase chemical synthesis)À» ÅëÇØ »ý»êÇÒ °æ¿ì »ý»ê ºñ¿ë(1g ´ç 100-600$, Yeung et al., 2011)ÀÌ ³ô¾ÆÁ® °æÁ¦¼ºÀÌ ³·¾ÆÁö±â ¶§¹®¿¡ ½ÇÁ¦·Î Á¦Ç°È­µÈ °ÍÀº ¾ÆÁ÷ ¾ø´Â ½ÇÁ¤ÀÌ´Ù. µû¶ó¼­ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ °æÁ¦ÀûÀÎ ´ë·® »ý»ê¹ýÀ» È®¸³Çϱâ À§ÇÏ¿© ¸¹Àº ¿¬±¸°¡ ÁøÇàµÇ°í ÀÖ´Ù. º» ³í°í¿¡¼­´Â »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ´ë·®»ý»ê ¹× ½Ç¿ëÈ­¿¡ ´ëÇÑ ÃÖ±Ù ¿¬±¸µ¿ÇâÀ» »ìÆ캸°íÀÚ ÇÑ´Ù.


Ç¥1. ÀÓ»ó½ÃÇè ÁßÀÎ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å

[Modified from Bassetti et al., 2013]


2. ´ëÀå±ÕÀ» ÀÌ¿ëÇÑ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ »ý»ê
ÇöÀç±îÁö yeast, insect cell, mammalian cell, plant µîÀÇ ´Ù¾çÇÑ expression host¸¦ »ç¿ëÇÏ´Â non-bacterial heterologous expression systemÀÌ °³¹ßµÇ¾úÁö¸¸ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ´ë·®»ý»êÀ» À§ÇÑ host organismÀ¸·Î´Â Escherichia coli°¡ °¡Àå ³Î¸® »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù(Yin et al., 2007). »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 E. coli¿¡¼­ ¹ßÇö½Ãų °æ¿ì »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ Æ¯Â¡(anti-bacterial activity, small size, high cationic property)À¸·Î ÀÎÇØ ¼÷ÁÖ ¼¼Æ÷¿¡ ´ëÇØ ¼¼Æ÷µ¶¼ºÀ» ³ªÅ¸³»°Å³ª ´Ü¹éÁú ºÐÇØÈ¿¼Ò¿¡ ÀÇÇØ ½±°Ô ºÐÇØ°¡ µÇ´Â ¹®Á¦Á¡ÀÌ ÀÖ´Ù. µû¶ó¼­ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 carrier protein°ú °áÇÕ½ÃŲ ÇüÅ·Π¹ßÇö½ÃŲ µÚ, chemical ¶Ç´Â enzymatic cleavage °úÁ¤À» ÅëÇØ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ¾ò¾î³»´Â fusion expression Àü·«ÀÌ ÁÖ·Î »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù.  

 

1) Fusion expression
»ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ fusion expression¿¡ °¡Àå ³Î¸® »ç¿ëµÇ´Â carrier proteinÀº thioredoxin°ú glutathione trasferase(GST)ÀÌ´Ù(Ç¥2). À̵éÀº ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúÀÇ E. coli cytoplasm¿¡¼­ÀÇ solubility¸¦ Áõ°¡½ÃÄÑÁÖ´Â ÀåÁ¡À» °¡Áö¸ç, ƯÈ÷ thioredoxinÀº size(11.8 kDa)°¡ À۱⠶§¹®¿¡ peptide-to-carrier ratio¸¦ Áõ°¡½ÃÄÑ ³ôÀº ¼öÀ²À» È®º¸ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÃÖ±Ù µé¾î¼­´Â Ÿ°Ù ´Ü¹éÁúÀÇ folding°ú solubility¸¦ Çâ»ó½ÃÄÑÁÖ´Â °ÍÀ¸·Î ¾Ë·ÁÁ® ÀÖ´Â small ubiquitin-related modifier(SUMO)µµ ¸¹ÀÌ »ç¿ëµÇ°í Àִµ¥, SUMO ¿ª½Ã thioredoxin°ú ¸¶Âù°¡Áö·Î size(11.2 kDa)°¡ À۱⠶§¹®¿¡ peptide ¼öÀ² Ãø¸é¿¡¼­ À¯¸®ÇÏ´Ù. GST´Â carrier proteinÀ¸·Î¼­ÀÇ ±â´É»Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó immobilized glutathioneÀ» ÀÌ¿ëÇØ Á¤Á¦°¡ °¡´ÉÇÑ affinity tagÀ¸·Î¼­ÀÇ ±â´ÉÀ» µ¿½Ã¿¡ °¡Áö´Â ¹Ý¸é, thioredoxin°ú SUMOÀÇ °æ¿ì fusion proteinÀ» Á¤Á¦Çϱâ À§Çؼ­´Â Ãß°¡ÀûÀÎ affinity tagÀÌ ÇÊ¿äÇϸç ÁÖ·Î poly histidine tagÀÌ »ç¿ëµÈ´Ù.
Thioredoxin°ú °°Àº solubility-enhancing carrier»Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó, »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ fusion expression¿¡´Â inclusion body Çü¼ºÀ» À¯µµÇÏ´Â PurF fragment, ketosteroid isomerase(KSI), TAF12 histone fold domain µîÀÇ aggregation-promoting carrierµµ »ç¿ëµÈ´Ù(Ç¥2). ÀÌ·¯ÇÑ aggregation-promoting carrier¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ insoluble expressionÀº soluble expression¿¡ ºñÇØ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ µ¶¼º ¿ÏÈ­¿Í ´Ü¹éÁú ºÐÇØÈ¿¼Ò¿¡ ÀÇÇÑ ºÐÇØ ¹æÁö¿¡ À¯¸®ÇÑ Ãø¸éÀÌ ÀÖÀ¸¸ç, centrifugationÀ» ÅëÇØ inclusion body¸¦ ½±°Ô ȸ¼öÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ÀåÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù.

 

Ç¥2. Fusion expressionÀ» ÀÌ¿ëÇÑ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ »ý»ê

 

Fusion protein ÇüÅ·Π¹ßÇöµÈ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 carrier proteinÀ¸·ÎºÎÅÍ ºÐ¸®Çϱâ À§Çؼ­´Â chemical ¶Ç´Â enzymatic cleavage °úÁ¤ÀÌ ÇÊ¿äÇÏ´Ù(Ç¥3). CNBr, formic acid, hydroxylamineÀ» ÀÌ¿ëÇÑ chemical cleavageÀÇ °æ¿ì enzymatic cleavage¿¡ ºñÇØ »ó´ëÀûÀ¸·Î ºñ¿ëÀÌ Àû°Ô ¼Ò¿äµÇ´Â ¹Ý¸é, »ç¿ëµÇ´Â chemicalÀÌ ÀÎü¿¡ À¯ÇØÇϸç side-chain modificationÀ» ÀÏÀ¸Å²´Ù´Â ´ÜÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù. Enzymatic cleavageÀÇ °æ¿ì Àü¹ÝÀûÀÎ È¿À²ÀÌ chemical cleavage¿¡ ºñÇØ ¶³¾îÁø´Ù. Fusion proteinÀÇ cleavage¿¡ ÁÖ·Î »ç¿ëµÇ´Â enzymeÀ¸·Î´Â enterokinase, factor Xa, thrombin, tobacco etch virus(TEV) protease, SUMO protease°¡ Àִµ¥, ÀÌÁß SUMO protease¿Í TEV protease´Â ¼Ò·®ÀÇ urea°¡ Á¸ÀçÇϴ ȯ°æ¿¡¼­µµ È°¼ºÀ» À¯ÁöÇϸç, ºñ±³Àû ½±°Ô ´ë·® »ý»êÇÏ¿© »ç¿ëÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ÀåÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù. ƯÈ÷ SUMO proteaseÀÇ °æ¿ì ƯÁ¤¼­¿­À» ÀÎÁöÇÏ´Â °ÍÀÌ ¾Æ´Ï¶ó SUMO ´Ü¹éÁúÀÇ 3Â÷ ±¸Á¶¸¦ ÀÎÁöÇÏ¿© cleavage¸¦ ÀÏÀ¸Å°¹Ç·Î cleavage Á¤È®µµ°¡ ³ôÀ¸¸ç, cleavage ÈÄ native N-terminalÀ» °¡Áö´Â target peptide¸¦ ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Â ÀåÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù. ¹Ý¸é enterokinase, factor Xa, thrombinÀº °¡°ÝÀÌ ºñ½Î°í, pH º¯È­ ¹× chaotrope¿¡ Ãë¾àÇÑ °ÍÀ¸·Î ¾Ë·ÁÁ® ÀÖ´Ù(Li, 2011).

 

Ç¥3. ÀÚÁÖ »ç¿ëµÇ´Â cleavage reagent

[Modified from Li, 2011]

 

2) ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦ °úÁ¤ ´Ü¼øÈ­¸¦ ÅëÇÑ °æÁ¦¼º È®º¸
»ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 carrier protein°ú fusion½ÃÄÑ »ý»êÇÒ °æ¿ì »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ host cell¿¡ ´ëÇÑ µ¶¼ºÀ» ¾ïÁ¦ÇÏ°í host cellÀÌ °¡Áø ¿©·¯ ´Ü¹éÁú ºÐÇØÈ¿¼Ò·ÎºÎÅÍ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 º¸È£ÇÏ¿© E. coli¿¡¼­ÀÇ »ý»êÀ» °¡´ÉÇÏ°Ô ÇÏÁö¸¸ ¸î°¡ÁöÀÇ ´ÜÁ¡ÀÌ Á¸ÀçÇÑ´Ù. ¸ÕÀú carrier proteinÀ¸·ÎºÎÅÍ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ºÐ¸®Çϱâ À§Çؼ­´Â toxic chemicalÀ̳ª °ªºñ½Ñ enzymeÀ» ÀÌ¿ëÇÑ cleavage°¡ ÇÊ¿äÇÏ¸ç ´ëºÎºÐ ÀÌ·¯ÇÑ cleavage °úÁ¤Àº ³·Àº È¿À²À» °¡Áø´Ù. ¶ÇÇÑ ¹ßÇöµÈ fusion protein ¹× »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦Çϱâ À§Çؼ­´Â ¿©·¯ ´Ü°èÀÇ chromatography ±â¹ÝÀÇ Á¤Á¦°úÁ¤ÀÌ ÇÊ¿äÇѵ¥ ÀÌ ¿ª½Ã °æÁ¦¼ºÀ» ³·Ãá´Ù. µû¶ó¼­ ÃÖ±Ù ¿¬±¸µéÀº »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦ °úÁ¤À» ÁÙÀÓÀ¸·Î½á ´ë·®»ý»êÀ» À§ÇÑ °æÁ¦¼º È®º¸¿¡ ÃÊÁ¡À» ¸ÂÃß°í ÀÖ´Ù.
InteinÀº RNAÀÇ intron¿¡ ´ëÀÀµÇ´Â °³³äÀÇ proteinÀ¸·Î½á protein splicing °úÁ¤ Áß Àü±¸Ã¼ ´Ü¹éÁú·ÎºÎÅÍ ½º½º·Î¸¦ À߶󳻴 ´É·ÂÀÌ ÀÖ´Ù. Bioseparation¿¡ »ç¿ëµÇ´Â inteinÀº thiol reagent ó¸®, pH ¹× ¿Âµµ º¯È­¿¡ ÀÇÇØ N-terminal ¶Ç´Â C-terminal cleavage°¡ ÀϾ´Â °ÍÀÌ Æ¯Â¡ÀÌ´Ù. µû¶ó¼­ fusion expression¿¡ inteinÀ» carrier proteinÀ¸·Î »ç¿ëÇÒ °æ¿ì fusion proteinÀ¸·ÎºÎÅÍ enzymatic cleavage °úÁ¤ ¾øÀÌ Å¸°Ù »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ºÐ¸®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. InteinÀº fusion proteinÀÇ Á¤Á¦¸¦ À§ÇØ ÁÖ·Î chitin-binding domain(CBD) ¶Ç´Â elastin-like peptide(ELP)°ú ÇÔ²² »ç¿ë µÇ´Âµ¥ CBDÀÇ °æ¿ì chitin resinÀ» »ç¿ëÇÏ¿© affinity purificationÀÌ °¡´ÉÇÏ´Ù. ƯÈ÷ ELP´Â ¿Âµµ¿¡ µû¶ó °¡¿ªÀûÀ¸·Î »óº¯È­Çϴ Ư¡(inverse transition cycling)À» °¡Áö°í Àֱ⠶§¹®¿¡ intein°ú ÇÔ²² carrier proteinÀ¸·Î »ç¿ëÇÒ °æ¿ì enzymatic cleavage ¹× affinity purification °úÁ¤ ¾øÀÌ °£´ÜÈ÷ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù(Shen et al., 2010).
Transitionally coupled-two cistron expression systemÀº carrier protein°ú »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 Á÷Á¢ fusion½ÃÅ°Áö ¾Ê°í µ¶¸³ÀûÀÎ »óÅ·Π¹ßÇö½ÃŲ´Ù. ÀÌ ½Ã½ºÅÛÀº ù ¹ø° cistron°ú µÎ ¹ø° cistronÀÌ °¢°¢ carrier protein(anionic polypeptide)°ú »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 codingÇÏ°í Àִµ¥, ù ¹ø° cistronÀÇ termination codonÀÌ µÎ ¹ø° cistronÀÇ start codon°ú 5'-TAATG-3' ÇüÅ·Πoverlap µÇ¾îÀÖ¾î translationµÈ anionic polypeptide¿Í »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å´Â ½Ã°ø°£ÀûÀ¸·Î ÀÎÁ¢ÇÏ°Ô À§Ä¡ÇÏ¿© insoluble complex¸¦ ÀÌ·ç°Ô µÈ´Ù. µû¶ó¼­ inclusion bodyÀÇ solubilization ÈÄ¿¡ º°µµÀÇ Àý´Ü °úÁ¤ ¾øÀÌ ion-exchange chromatography¸¦ ÅëÇØ ¹Ù·Î ºÐ¸®°¡ °¡´ÉÇÏ´Ù(±×¸²1A, Jang et al., 2009).
»ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ´ë·®»ý»êÀ» À§ÇÑ °æÁ¦¼ºÀ» Çâ»ó½ÃÅ°´Â ¶Ç ´Ù¸¥ ¹æ¹ýÀº »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦ÇÏÁö ¾Ê°í »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 expressionÇÑ host cellÀ» whole cell antibiotics ÇüÅ·ΠÁ÷Á¢ »ç¿ëÇÏ´Â °ÍÀÌ´Ù. Pepsin cleavage site¸¦ °¡Áö´Â »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å ÁßÇÕü(multimer)¸¦ E. coliÀÇ Ç¥¸é ´Ü¹éÁúÀÎ Lpp-OmpA¿¡ À¶ÇÕ½ÃŲ ÇüÅ·Πǥ¸é ¹ßÇö½ÃŲ ÈÄ À̸¦ »ýü ³»¿¡ Åõ¿©ÇÏ°Ô µÇ¸é À§(stomach)¿¡¼­ pepsin¿¡ ÀÇÇØ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵尡 ´Ü·®Ã¼·Î Àý´ÜµÇ¾î ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦ °úÁ¤ ¾øÀÌ »ýü ³»¿¡¼­ Ç×±ÕÈ°¼ºÀ» ³ªÅ¸³»°Ô µÈ´Ù(±×¸² 1B, Shin et al., 2013).

±×¸²1. Translationally coupled two-cistron expression system(A)°ú »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å ÁßÇÕüÀÇ E. coli Ç¥¸é ¹ßÇö ½Ã½ºÅÛ(B)


3. ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ »ýü¹æ¾îÆéŸÀÌµå »ý»ê
ÃÖ±Ù µé¾î ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º°¡ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ »ý»ê¡¤¿î¹ÝÀ» À§ÇÑ host cell·Î¼­ ÁÖ¸ñ¹Þ°í ÀÖ´Ù(Ç¥4). ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º´Â bile-resistantÇÑ Æ¯Â¡À» °¡Áö°í ÀÖ´Â ±×¶÷¾ç¼º±ÕÀ¸·Î¼­ ÁÖ·Î Lactobacillus, Lactococcus, Enterococcus, Streptococcus, Pediococcus, Leuconostoc, Bifidobacterium¿¡ ¼ÓÇÏ´Â Á¾ÀÌ´Ù. ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º´Â ¼÷ÁÖÀÇ Àå³»¿¡ »óÁÖÇϰųª ¶Ç´Â ÀϽÃÀûÀ¸·Î ¸Ó¹«¸£¸é¼­ À庮 °­È­, º´¿øüÀÇ ¾ïÁ¦, ¸é¿ª Á¶Àý µîÀÇ ±â´ÉÀ» ÅëÇØ ¼÷ÁÖÀÇ °Ç°­¿¡ ÀÌ·Î¿î ¿ªÇÒÀ» ÇÑ´Ù(Mandal et al., 2014). »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å´Â ÀϹÝÀûÀ¸·Î ³·Àº »ýü ³» ¾ÈÁ¤¼ºÀ¸·Î ÀÎÇØ Åõ¿©¹æ¹ýÀÌ ¸Å¿ì Á¦ÇÑÀûÀ̸ç ƯÈ÷ °æ±¸¸¦ ÅëÇÑ Åõ¿©´Â ºÒ°¡´ÉÇÏÁö¸¸ ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º·Î ÇÏ¿©±Ý »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 »ý»ê¡¤ºÐºñÇϵµ·Ï ÇÑ´Ù¸é »ç¶÷ ¶Ç´Â °¡ÃàÀÇ Àå³»·Î »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ¾ÈÀüÇÏ°Ô Àü´ÞÇÒ ¼ö ÀÖÀ» »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½ºÀÇ º»·¡ ±â´É°ú »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ Ç×±ÕÀÛ¿ëÀ» µ¿½Ã¿¡ °¡Áú °ÍÀ¸·Î ¿¹»óµÈ´Ù(±×¸²2).

±×¸²2. »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 »ý»êÇÏ´Â ÀçÁ¶ÇÕ ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º ¹× ÀÌÀÇ È°¿ë
[Modified from Mandal et al., 2014]

 

ÇÑ ¿¹·Î Volzing et al.Àº A3APO¿Í alyteserinÀ» »ý»ê¡¤ºÐºñÇÏ´Â ÀçÁ¶ÇÕ L. lactis¸¦ °³¹ßÇÏ°í º´¿ø¼º E. coli O157 ¹× Salmonella typhimurium¿¡ ´ëÇØ Ç×±Õ·ÂÀ» °¡Áö´Â °ÍÀ» º¸°íÇÏ¿´´Ù(Volzing et al., 2013). ÇÏÁö¸¸ ´ëºÎºÐÀÇ ¿¬±¸°¡ º´¿ø±Õ¿¡ ´ëÇÑ Æ¯À̼ºÀÌ ³·Àº »ýü¹æ¾îÆéŸÀÌµå ¶Ç´Â bacteriocinÀ» ´Ü¼øÈ÷ ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º·Î ÇÏ¿©±Ý »ý»ê¡¤ºÐºñÇϵµ·Ï Çϴµ¥ ±×Ä¡°í Àִµ¥, ÀÌ´Â ½ÇÁ¦ ü³»¿¡ »ç¿ëÇÒ °æ¿ì ºñƯÀÌÀûÀÎ Ç×±ÕÀÛ¿ëÀ¸·Î ÀÎÇØ Ã¼³» Á¤»ó¼¼±ÕÃÑÀ» Æı«ÇÏ¿© ÀÌÂ÷°¨¿°À» À¯¹ßÇÏ´Â µîÀÇ ¹®Á¦Á¡À» À¯¹ßÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. µû¶ó¼­ ÀÌ·¯ÇÑ ¹®Á¦¸¦ ÇØ°áÇϱâ À§Çؼ­´Â ¸ÕÀú º´¿ø±Õ¿¡ ƯÀÌÀûÀ¸·Î ÀÛ¿ëÇÏ´Â »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 °³¹ßÇÏ´Â °ÍÀÌ ¼±ÇàµÉ ÇÊ¿ä°¡ ÀÖ´Ù. ¶ÇÇÑ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ »ý»êÀ» Á¶ÀýÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¹ßÇöÁ¶Àý½Ã½ºÅÛÀÇ °³¹ßµµ º´ÇàµÇ¾î¾ß ÇÑ´Ù.
 

Ç¥4. ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ »ýü¹æ¾îÆéŸÀÌµå ¹× bacteriocin »ý»ê

[Modified from Mandal et al., 2014]


4. °íÂû
»ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵å´Â °íºÎ°¡ ±â´É¼º ÆéŸÀ̵å·Î Â÷¼¼´ë Ç×»ýÁ¦·Î ÁÖ¸ñ¹Þ°í ÀÖÁö¸¸ ³ôÀº »ý»êºñ¿ë°ú ³·Àº »ýü³» ¾ÈÁ¤¼º, ºñƯÀÌÀû ÀÛ¿ë µîÀ¸·Î ÀÎÇØ »ó¿ëÈ­¿¡ ¸¹Àº Á¦¾àÀÌ ÀÖ¾î ¿Ô´Ù.  ±×µ¿¾È »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ ½Ç¿ëÈ­¸¦ À§ÇÑ °æÁ¦¼ºÀ» È®º¸Çϱâ À§ÇØ ´Ù¾çÇÑ heterologous expression system¿¡ °üÇÑ ¿¬±¸°¡ ÁøÇàµÇ¾úÁö¸¸, ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦ °úÁ¤¿¡¼­ ¼Ò¿äµÇ´Â ½Ã°£°ú ºñ¿ëÀ¸·Î ÀÎÇØ ½Ç¿ëÈ­µÇ±â¿¡´Â ¹ÌÈíÇÏ¿´´Ù. ÇÏÁö¸¸ »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 »ý»ê¡¤ºÐºñÇÏ´Â ÀçÁ¶ÇÕ ÇÁ·Î¹ÙÀÌ¿Àƽ½º¸¦ whole cell antibiotics·Î ÀÌ¿ëÇÑ´Ù¸é ºÐ¸®¡¤Á¤Á¦°¡ ÇÊ¿ä¾ø°Ô µÇ¾î »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵åÀÇ »ý»ê ´Ü°¡¸¦ ȹ±âÀûÀ¸·Î ³·Ãâ ¼ö ÀÖÀ» »Ó ¾Æ´Ï¶ó, »ýü¹æ¾îÆéŸÀ̵带 ÀÛ¿ë ºÎÀ§·Î Á÷Á¢ Àü´ÞÇÒ ¼ö ÀÖ¾î ±âÁ¸ÀÇ ±¹¼ÒÄ¡·áÁ¦·Î °³¹ßµÇ´ø ÇÑ°è¿¡¼­ ¹þ¾î³ª È°¿ë¹üÀ§¸¦ °æ±¸Åõ¿© Ä¡·áÁ¦, °Ç°­ º¸Á¶Á¦, °¡Ãà»ç·á ÷°¡Á¦µî¿¡ À̸£±â±îÁö Å©°Ô ³ÐÇôÁÙ °ÍÀ¸·Î ±â´ëµÈ´Ù.


Àο빮Çå

1. Bassetti M et al. (2013) New antibiotics for bad bugs: where are we?. Ann Clin Microbiol Antimicrob 28, doi:10.1186/1476-0711-12-22.
2. Chikindas ML et al. (1995) Expression of lactococcin A and pediocin PA-1 in heterologous hosts. Lett Appl Microbiol 21, 183-189.
3. Feng X et al. (2014) Design and high-level expression of a hybrid antimicrobial peptide LF15-CA8 in Escherichia coli. J Ind Microbiol Biotechnol 41, 527-534.
4. Feng X et al. (2010) Expression and purification of an antimicrobial Peptide, bovine lactoferricin derivative LfcinB-w10 in Escherichia coli. Curr Microbiol 60, 179-184.
5. Fynn S et al. (2002) Characterization of the genetic locus responsible for the production by the probiotic bacterium Lactobacillus salivarius subsp. salivarius UCC118. Microbiology 148, 973-984.




Total:118 page:(8/4)
70 Á¤º¸ ±èÇå½Ä ÀÚ¿¬»ìÇؼ¼Æ÷¿Í Ç׾ϸ鿪ġ·á ¿¬±¸µ¿Çâ 16.08.03 10236
69 Á¤º¸ ¼ÛÀ籤 ÀÚ¿¬ÀÇ ÇÕ¼º Àü·«À» ½ÇÇè½Ç·Î ¿Å°Ü¿Â È¿¼Ò ¿¬¼Ó´Ü.. 16.07.19 7788
68 Á¤º¸ Àü»ó¿ë ¾Ï Ä¡·á¿ë Ç¥ÀûÇü ³ª³ë¾à¹°Àü´Þ½Ã½ºÅÛÀÇ °³¹ß µ¿.. 16.07.19 17929
67 Á¤º¸ ÀÌÁö¿À Àΰø ´Ü¹éÁú ³ª³ë±¸Á¶Ã¼ ÃֽŠ¿¬±¸µ¿Çâ 16.04.12 8846
66 Á¤º¸ À̴뿱 Let-7 miRNA biogenesis 16.03.31 11219
65 Á¤º¸ Á¤¿øÀÏ Class III ADH È°¼º¾ïÁ¦¸¦ ÅëÇÑ °£¼¶À¯È­ Ä¡·á±â.. 16.03.31 11750
64 Á¤º¸ ±è¹Ì¿µ ¾ÏÀüÀÌ Ä¡·áÁ¦ °³¹ßÀ» À§ÇÑ ÃֽŠ¿¬±¸ µ¿Çâ 16.03.18 8713
63 Á¤º¸ À±¿µ°É ¹ÌÅäÄܵ帮¾Æ DNA ÇÕ¼º»ý¹°ÇÐ ¿¬±¸ µ¿Çâ 16.03.07 10413
62 Á¤º¸ ÇÑ°©ÈÆ Áø±Õ¿¡¼­ ¹ß°ßµÈ »õ·Î¿î ±â´ÉÀÇ ¸ÞÆ¿ÀüÀÌÈ¿¼Òµé°ú.. 16.01.07 12024
61 Á¤º¸ ÀÌÇö¼ö È¿¼Ò¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ Ãµ¿¬¹° À¯µµÃ¼ÀÇ ±Û¸®ÄÚ½ÇÈ­ 16.01.07 12691
60 Á¤º¸ ¹æµÎÈñ ÇÕ¼º »ý¹°ÇÐ ¿¬±¸¸¦ À§ÇÑ ±â¹Ý ±â¼ú·Î¼­ÀÇ ´Ü¼¼Æ÷.. 16.01.07 13798
59 Á¤º¸ ±è±ÙÁß À¯ÀüÀÚ ¹ßÇö°ú °ü·ÃµÈ »õ·Î¿î ³í¸®¿Í ÇÕ¼º»ý¹°ÇÐ.. 15.12.30 16614
58 Á¤º¸ ±èÈñÅà ÆéŸÀÌµå ±â¹Ý ÀÚ°¡ Á¶¸³ ±¸Á¶Ã¼ ¿¬±¸ÀÇ µ¿Çâ ¹× .. 15.12.30 11206
57 Á¤º¸ ±èÁöÇö ½Ã½ºÅÛ»ý¹°ÇÐÀÇ ÇÕ¼º»ý¹°ÇÐ Àû¿ë ¿¬±¸µ¿Çâ 15.09.10 20732
56 Á¤º¸ ±èµ¿¸³ ¹Ì»ý¹°À» ÀÌ¿ëÇÑ È­Çй°Áú »ý»ê ¿¬±¸µ¿Çâ 15.09.02 12331
55 Á¤º¸ ÀÌÁ¤°É »ýÃ˸ÅÀÇ ¾÷±×·¹À̵ùÀ» À§ÇÑ °íÁ¤È­ ¿¬±¸ µ¿Çâ 15.08.21 16147
[1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8]