¹ÚÅ׸®¾Æ ±â¹ÝÀÇ À¯¿ë ´Ü¹éÁú ¹ßÇöÀü·« Ãֽŵ¿Çâ
Àü³²´ëÇб³ »ý¹°Çаú ±è±ÙÁß ±³¼ö
À¯¼ö°æ, ÃÖÇýÁö ¹Ú»ç°úÁ¤
1.°³¿ä
´Ü¹éÁú ¹ßÇö°ú À̸¦ ±â¹ÝÀ¸·Î ÇÑ °í»ý»êÀº »ýÈÇÐ, »ý¸®ÇÐ ¹× ¸é¿ªÇÐ µîÀ» Æ÷ÇÔÇÑ ±âÃÊ ¿¬±¸ºÐ¾ß»Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó, ¼ÒÀç, ½ÄÇ° ¹× ÀÇ·á µî¿¡ °ÉÄ£ ´Ù¾çÇÑ »ê¾÷ ºÐ¾ß¿¡¼ ¿ä±¸ÇÏ´Â Áß¿äÇÑ ±â¹ÝºÐ¾ßÀÌ´Ù. ÃÖ±Ù °úÇаú ÀÇÇÐÀÇ ¹ßÀüÀ¸·Î Àΰ£ ¼ö¸íÀÌ ´Ã¾î³ª°í, °Ç°ÇÏ°í ÇູÇÏ°Ô »ì¾Æ°¡°íÀÚ ÇÏ´Â »çȸÀû¼ö¿äÀÇ Áõ°¡·Î ÀÎÇØ, ±â´É¼º ´Ü¹éÁú ½ÃÀåÀº Áúº´ Ä¡·á¸¦ À§ÇÑ ÀÇ·á ºÐ¾ß¸¦ ³Ñ¾î, Áúº´ÀÇ ¿¹¹æÀ̳ª ¹Ì¿ë, ÀÚ°¡¸é¿ª ÁõÁø µî, °ú°Å õ¿¬¹° ¼ÒÀç Áß½ÉÀ̾ú´ø ºÐ¾ß±îÁö ¿µ¿ªÀ» È®´ëÇÏ°í ÀÖ´Ù. ÀÌ´Â ±â´É¼º ´Ü¹éÁúÀÇ ¼¼°è½ÃÀå ±Ô¸ð°¡ 2020 ³â¿¡´Â 2,780 ¾ï ´Þ·¯¿¡ À̸¦ °ÍÀ̶ó´Â Çѱ¹º¸°Ç»ê¾÷ÁøÈï¿øÀÇ Àü¸ÁÀ» ÅëÇؼµµ È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
´Ü¹éÁú ¹ßÇö°ú »ý»êºÐ¾ß¿¡¼´Â µ¿¹° ¼¼Æ÷, °ïÃæ ¼¼Æ÷ ¹× È¿¸ð µî ´Ù¾çÇÑ ¼÷ÁÖµéÀÌ »ç¿ëµÇ°í ÀÖÀ¸¸ç, À̸¦ Á¦¾îÇϱâ À§ÇÑ È¹±âÀûÀÎ ºÐÀÚ»ý¹°ÇÐÀû µµ±¸°¡ °³¹ßµÇ¾î ÀÖ´Ù. ÀÌÁß¿¡¼µµ ´ëÀå±ÕÀº ªÀº ¹è¾ç ½Ã°£, ºñ±³Àû ´Ü¼øÇÑ ¹è¾ç Á¶°Ç°ú ¹èÁö¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ °í³óµµ ¹è¾çÀÇ ¿ëÀÌÇÔ°ú ´õºÒ¾î ¿À·£ ±â°£ ÃàÀûµÈ ¸¹Àº ¿¬±¸°á°ú µîÀ¸·Î ÀÎÇØ ´Ù¸¥ ¼÷Áֵ鿡 ºñÇØ ³Î¸® È°¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù. ±×·¯³ª ÀÌÁ¾ ¼÷ÁַκÎÅÍ À¯·¡ÇÑ ´Ü¹éÁúÀ» º»·¡ÀÇ ¼÷ÁÖ¿Í ´Ù¸¥ folding landscapes¸¦ °®´Â ´ëÀå±Õ¿¡¼ °ú¹ßÇö ½Ãų °æ¿ì¿¡ ³ªÅ¸³ª´Â Çö»óµé(±â´ÉÀÌ ¾ø´Â ºÒ¿ë¼º ¹ßÇö ȤÀº ³·Àº ¹ßÇöÀ²)Àº Àß ¾Ë·ÁÁø ÇÑ°èÁ¡ÀÌ´Ù. ±×·³¿¡µµ ºÒ±¸ÇÏ°í ¸ñÀû ´Ü¹éÁúÀÇ ¹ßÇö¿¡ ÀûÇÕÇÑ Àü·«ÀÇ °³¹ßÀ» ÅëÇØ ´Ù¾çÇÑ ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúµéÀÌ ´ëÀå±Õ¿¡¼ ¼º°øÀûÀ¸·Î ¹ßÇöµÇ°í ÀÖ´Ù.
´ëÀå±Õ¿¡¼ ´Ü¹éÁúÀ» ¹ßÇöÇϱâ À§ÇÑ ÀüÇüÀûÀÎ Àü·«Àº ¹èÁö Á¶¼º, ¹è¾ç Á¶°Ç (¿Âµµ, pH, ¿ëÁ¸»ê¼Ò µîÀ» Á¶Àý), ¹ßÇöÀ¯µµ Á¶°Ç ÃÖÀûÈ, ¹ßÇö ½Ã½ºÅÛ°³¹ßÀ̳ª °³·® µîÀ» Æ÷ÇÔÇÑ´Ù. ¹ßÇö ½Ã½ºÅÛ°³¹ßÀ̳ª °³·®Àº, ÀϹÝÀûÀ¸·Î ¼÷ÁÖÀÚü¸¦ °³·®ÇÏ´Â °Í°ú ÇÃ¶ó½º¹Ìµå ±â¹ÝÀÇ ¹ßÇö º¤Å͸¦ °³¹ßÇÏ´Â °ÍÀ¸·Î ±¸ºÐÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÀüÀÚÀÇ °æ¿ì, ´Ü¹éÁú Á¢ÈûÀ» µµ¿ÍÁÖ´Â molecular chaperonÀ» °ú¹ßÇöÇÏ´Â ¼÷ÁÖ, ¸· ´Ü¹éÁú ¹ßÇö¿¡ µû¸¥ µ¶¼ºÀ» ¾àȽÃŲ ¼÷ÁÖ, ´ëÀå±ÕÀÇ ¼¼Æ÷ÁúÀ» »êÈÀû ȯ°æÀÌ À¯µµµÇµµ·Ï °³·®ÇÑ ¼÷ÁÖ, rare codon tRNA¸¦ °ú¹ßÇöÇÏ´Â ¼÷ÁÖ µî, ¸ñÀû ´Ü¹éÁúÀÇ Æ¯¼º¿¡ µû¶ó ¼±Åà °¡´ÉÇÑ ´Ù¾çÇÑ ¼÷ÁÖµéÀÌ Àß ¾Ë·ÁÁ® ÀÖ´Ù. ÈÄÀÚÀÇ ¹ßÇö º¤ÅÍ ½Ã½ºÅÛ¿¡ °æ¿ìµµ, ´Ü¹éÁú Á¢ÈûÀ» µµ¿ÍÁÖ´Â maltose binding protein, glutathione S trasnferase ¹× NusA µîÀÇ À¶ÇÕ ÆÄÆ®³Ê, ÇÁ·Î¸ðÅÍ (T5, T7, tac, trc ¹× cspA ÇÁ·Î¸ðÅÍ µî), transcription terminator (T0 ¹× rrnB terminator µî), Àü»ç Á¶ÀýÀÎÀÚ (LacI ¹× AraC), replication ori (pUC, ColE1, pBR322 ¹× p15A µî) µîÀÌ ´Ù¾çÇÏ°Ô Á¶ÇÕµÈ º¤Å͵éÀÌ ÀÌ¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù(±×¸² 1). »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó golden gateway cloning ¹× Gibson assembly µî°ú °°Àº ligation independent cloningÀ» ÅëÇØ ´Ù¾çÇÑ ±¸¼ºÀ» °®´Â ¿©·¯ Á¾·ùÀÇ ¹ßÇö º¤Å͵鿡 ¸ñÀû ´Ü¹éÁúÀ» ¾ÏÈ£ÈÇÏ´Â À¯ÀüÀÚ¸¦ µ¿½Ã¿¡ cloningÀÌ °¡´ÉÇÑ ½Ã½ºÅÛ ¶ÇÇÑ Á¸ÀçÇØ, ¹Ýº¹ÀûÀÎ cloningÀ¸·Î ¼Ò¸ðÇÏ´Â ½Ã°£À» ÃÖ¼ÒÈ ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¹æ¹ýµéµµ ¼Ò°³µÇ°í ÀÖ´Ù. ÃÖ±Ù¿¡´Â ÀÌ·¯ÇÑ ¹ßÇö ½Ã½ºÅÛÀ» ÃÖÀûÈÇÏ´Â ÀüÇüÀûÀÎ Àü·«°ú ´õºÒ¾î, ±â º¸°íµÈ ¿©·¯ °á°úµéÀ» Åä´ë·Î µµÃâµÈ »ý¹°Á¤º¸ÇÐÀû µµ±¸µéÀ» ÀÌ¿ëÇØ Àü»ç ¹× ¹ø¿ª °³½Ã È¿À², ¹ø¿ª¼Óµµ, aggregation hot spot µîÀ» ¿¹ÃøÇÏ°í, ¸ñÀû ´Ü¹éÁúÀ» ¾ÏÈ£È ÇÏ´Â ¿°±â¼¿ ¶Ç´Â untranslational region (UTR)À» Àç¼³°èÇϰųª ¼öÁ¤ÇÏ´Â Àü·«µéÀÌ ÀÌÁ¾ ´Ü¹éÁú ¹ßÇöÀ» À§ÇØ Á¢¸ñµÇ°í ÀÖ´Ù.
¢Ñ ÀÚ¼¼ÇÑ ³»¿ëÀº ÷ºÎÆÄÀÏÀ» ÀÌ¿ëÇϽñ⠹ٶø´Ï´Ù